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做灌注固定
酒窝 发表于 2007-04-09 18:53:40
由于我的实验中需要做海马的透射电子显微镜，所以需要使用灌注固定，现把实验步骤记录如下：
1. 用10%水和氯醛麻醉大鼠，按照0.3ml/100g体重剂量腹腔注射。在注射时要有一种穿透腹膜的感觉，不能注射到皮下。
2. 大概7-8分钟的样子，大鼠麻醉完全，观察的指标主要是看看有没有翻滚，还有就是看看还有没有角膜反射。然后用止血钳夹住表皮，垂直向上抬起，加开腹腔，露出肝脏，再向上剪，露出横膈，剪开膈造成气胸。
3. 接着往上剪，暴露心脏，用包有白胶布（这样不会夹破心脏）的镊子夹住心脏，将灌注针从心尖搏动处插进去，直插入升主动脉，注意外面的心包膜，要小心，不要剪断动脉。打开灌注泵，快速剪开右心耳，注意右心耳不要剪的太大，要不然的话压力太低，这样动脉中的血冲不干净。
4. 用4度的0.9%生理盐水快速冲出全身血液，大概十几分钟的样子，不过我的这些数据均是使用灌注泵做的，所以时间比较短，如果是打吊瓶的话就会慢很多的。把血冲干净的标准是看肝脏变成土黄色，眼睛变白。
5. 然后快速将灌注泵的软管另一端放入灌注液中，仍然保持原速知道冲出气泡。减慢速度到全身痉挛，然后再减慢速度打入灌注液，大概十几分钟，需要300ml左右的灌注液。固定好的标志是全身变硬，肝脏有弹性。
6. 迅速剖开颅骨，取脑，剖离海马，放入固定液中固定。
1. 用10%水和氯醛麻醉大鼠，按照0.3ml/100g体重剂量腹腔注射。在注射时要有一种穿透腹膜的感觉，不能注射到皮下。
2. 大概7-8分钟的样子，大鼠麻醉完全，观察的指标主要是看看有没有翻滚，还有就是看看还有没有角膜反射。然后用止血钳夹住表皮，垂直向上抬起，加开腹腔，露出肝脏，再向上剪，露出横膈，剪开膈造成气胸。
3. 接着往上剪，暴露心脏，用包有白胶布（这样不会夹破心脏）的镊子夹住心脏，将灌注针从心尖搏动处插进去，直插入升主动脉，注意外面的心包膜，要小心，不要剪断动脉。打开灌注泵，快速剪开右心耳，注意右心耳不要剪的太大，要不然的话压力太低，这样动脉中的血冲不干净。
4. 用4度的0.9%生理盐水快速冲出全身血液，大概十几分钟的样子，不过我的这些数据均是使用灌注泵做的，所以时间比较短，如果是打吊瓶的话就会慢很多的。把血冲干净的标准是看肝脏变成土黄色，眼睛变白。
5. 然后快速将灌注泵的软管另一端放入灌注液中，仍然保持原速知道冲出气泡。减慢速度到全身痉挛，然后再减慢速度打入灌注液，大概十几分钟，需要300ml左右的灌注液。固定好的标志是全身变硬，肝脏有弹性。
6. 迅速剖开颅骨，取脑，剖离海马，放入固定液中固定。
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最新评论
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2007-07-04 00:17:40 匿名 61.134.*.*
酒窝你好，我也做灌注，用的是老式吊瓶，你能否详细描述一下你所用的灌注泵为何物呢？我一直在寻觅此类仪器，十分感谢。怎样跟你联系呢？
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2007-07-06 18:38:44 匿名 202.113.*.*
呵呵，好久没有来自家菜园子，没想到碰到同道中人了！
我所使用的灌注泵，外表上看起来是一个大小为20*15cm的“方盒子”，上面有旋钮可以调节灌注液的流速，在灌注泵的最前边有一个类似于槽类的物件，中间夹着一只橡皮管，左右皆开口，一边放入灌注液中，另一边皆有灌注针，插入主动脉。
我觉得用这个要比老式的吊瓶简单、方便，而且成功率很高。我们平均一天可以做15只左右。
至于具体仪器的型号我过几天去实验室看看，有的话我会在这里告诉你的。
